Эхинококк igG (eia 34 72 ) icon

Эхинококк igG (eia 34 72 )



НазваЭхинококк igG (eia 34 72 )
Дата конвертації15.08.2014
Розмір86.24 Kb.
ТипДокументи
джерело

ЭХИНОКОКК IgG (EIA - 3472)

ECHINOCOCCUS GRANULOSUS
IgG ELISA


иммуноферментный анализ для качественного и полуколичественного определения антител класса IgG к антигену ленточного червя рода Echinococcus в сыворотке человека.

Кат. № EIA-3472 96 определений



Принцип анализа

Набор ECHINOCOCCUS IgG ELISA - это набор для определения антител класса IgG к Эхинококку в сыворотке человека.

Микротитровальные стрипованные лунки в качестве твердой фазы покрыты антигенами Эхинококка. Разведенные образцы пациента и готовые к использованию контроли пипетируются в лунки. Во время инкубации специфичные к Эхинококку антитела положительных образцов и контролей связываются с иммобилизованными антигенами.

После промывки (для удаления несвязанных образцов и контролей) в лунки добавляются антитела IgG, конъюгированные пероксидазой хрена. Во время второй инкубации этот анти-IgG конъюгат связывается только с антителами IgG, в результате чего формируются иммунные комплексы с ферментативными связями.

После второй промывки (для удаления несвязанного конъюгата) сформированные иммунные комплексы (в случае положительного результата) определяются в ходе инкубации с субстратом ТМБ, в результате чего появляется голубое окрашивание. Голубое окрашивание меняется на желтое при добавлении серной кислоты для остановки индикаторной реакции.

Интенсивность окрашивания прямо пропорциональна количеству в образце антител IgG специфичных к Эхинококку.
Абсорбция считывается при 450 нм на микропланшетном ELISA - ридере.

Общее время инкубации: ^ 1 час, 45 минут

Реагенты и содержимое

12




^ Echinococcus (IgG) Микротитровальные стрипы

8-луночные (разламываемые) стрипы покрыты антигенами Эхинококка; также в наборе 1 держатель, 2 покровные фольги

100

мл

^ IgG Раствор для разведения образцов

Готов к использованию, зеленого цвета, pH 7,2±0,2 Содержит человеческую антисыворотку IgG

14

мл

Стоп-раствор

Готов к использованию, H2SO4 0,5 моль/л

Внимание!

Серная кислота разъедает глаза и кожу. Держать в недоступных для детей местах. При контакте с глазами тщательно промыть водой и проконсультироваться с врачем.

30

мл

^ Промывочный раствор

20х концентрат для 600 мл; pH 7,2±0,2

20

мл

Echinococcus анти-IgG Конъюгат

Готов к использованию, красного цвета

кроличья сыворотка анти-IgG человека, конъюгированная перокидазой

14

мл

^ Раствор ТМБ субстрата

Готов к использованию, 3’,3’,5’,5’-тетраметилбензидин

2

мл

Положительный контроль

2

мл

^ Отрицательный контроль

2

мл

Cut-off контроль

Стабильность и хранение

Реагенты стабильны до даты срока годности, указанной на этикетке при хранении при 2 - 8 °C.

^ Не использовать реагенты после окончания срока годности!

Подготовка реагентов

Рабочий промывочный раствор

Развести промывочный раствор 1+19 (напр. 10 мл + 190 мл) свежей, очищенной от бактерий редистилированной водой. потребление: ~5 мл на определение
кристаллы в растворе исчезают при нагревании до 37 °C на водяной бане.
стабильность после разведения: 4 недели при 2 ÷ 8 °C
^ Микротитровальные стрипы

Стрипы имеют вакуумную упаковку. Сразу после открытия упаковки и удаления стрипов оставшиеся стрипы необходимо запаковать герметично в пластиковую упаковку с влагопоглотителем, поставляемым в наборе и хранить 2 ÷ 8 °C.

^ Важные замечания:

· Данный набор предназначен только для диагностики «ин-витро».

· Не использовать вместе реагенты или стрипы из разных лотов.

· Не использовать вместе реагенты разных производителей.

· Не использовать реагенты после окончания срока годности , указанного на этикетке.

· Использовать только чистые наконечники для пипеток, пипетки и лабораторный инвентарь.

· Не путать колпачки реагентов во избежание кросс-контаминации.

· Плотно закрывать флаконы с реагентами сразу после использования.

· После первого открывания и последующего хранения проверять флаконы конъюгата и контролей на микробную контаминацию перед дальнейшим использованием.

· Во избежание кросс-контаминации и ложно завышенных результатов пипетировать образцы пациентов и раскапывать конъюгат без расплескивания прямо на дно лунок.

· Во время инкубации накрывать микротитровальные стрипы пленкой для предотвращения испарения

Подготовка образцов

Развести каждый образец пациента 1+100 раствором для разведения образцов, напр., 10 мкл образца + 1 мл раствора для разведения (хорошо смешать).
^ Примечание: Стандарты и отрицательный контроль готовы к использованию и их не надо разводить!
Подготовка к анализу

Внимательно прочитайте инструкцию перед выполнением анализа. Надежность результатов зависит от четкого следования инструкциям.

^ Очень важно довести все компоненты до комнатной температуры перед началом анализа!

Перед проведением анализа необходимо составить схему распределения и идентификации образцов и контролей с помощью формы вложенной в набор.

Отобрать требуемое количество микротитровальных стрипов или лунок и поместить их в держатель.

Разместите по меньшей мере:

1 лунка (напр. А1) для бланка субстрата

1 лунка (напр. B1) для отрицательного контроля

2 лунки (напр. C1+D1) для cut-off контроля

1 лунка (напр. E1) для положительного контроля

На усмотрение пользователя можно ставить образцы и контроли в дублях

^

Процедура анализа


Этап 1

a) Добавить

100 мкл готового к использ. отриц. контроля в лунки B1

100 мкл готового к использ. cut-off контроля в лунки С1+ D1

100 мкл готового к использ. полож. контроля в лунку E1 и

100 мкл каждого разведенного образца пациента

в оставшиеся лунки согласно схеме распределения

зарезервируйте лунку ^ A1 для бланк-субстрата!

накрывать лунки пленкой поставляемой в наборе

b) Инкубировать

1 час при 37 °C.

в течение времени инкубации приготовить требуемый объем

промывочного раствора См. (подготовка реагентов).

c) Удалить вакуумом содержимое лунок и промыть их 3 раза 300 мкл рабочего промывочного раствора.

Примечание:

Промывка очень важна! Плохая промывка может привести к низкой точности и завышенным значениям абсорбции.

^ В конце осторожно удалить остатки жидкости выстучав стрипы на салфетку перед следующим этапом!

Этап 2

a) Раскапать

100 мкл готового к использ. конъюгата Эхинококка IgG во все лунки кроме ^ A1 и накрыть их фольгой.

b) Инкубировать

 30 минут при комнатной температуре (от 20 до 25 °C).

Не подвергать воздействию прямого солнечного света!

c) повторить промывку как в этапе 1.

^ Примечание: осторожно удалить остатки жидкости выстучав стрипы на салфетку перед следующим этапом!

Этап 3

a) Раскапать
по 100 мкл готового к употр. раствора ТМБ во все лунки и
опять их накрыть.

b) Инкубировать ровно
  15 минут при комнатной температуре (20 ÷ 25 °C) в темноте.

c) Раскапать
по 100 мкл стоп-раствора (как и ТМБ) во все лунки.

Любое голубое окрашивание проявившееся во время инкубации, переходит в желтое.

Примечание: высоко-положительные образцы пациентов могут иметь темный осадок хромогена!

Измерение

Настроить микропланшетный ридер для ЕLISA на нуль используя бланк субстрата в лунке A1.

Если по техническим причинам ELISA ридер не может быть настроен на нуль используя бланк субстрат в лунке А1, вычитайте значение абсорбции лунки A1 из всех остальных значений абсорбции. Измерить абсорбцию во всех лунках при 450 нм и записать значения абсорбции для каждого контроля и образца пациента в схему.

Двойная длина волны – рекомендуется считывать на 620 нм как референтной длнне волны. Где применимо рассчитать среднее значение абсорбции всех дублей.

^ Оценка надежности результатов

Постановка анализа может считаться действительной при соблюдении следующих условий:

 бланк субстрата (A1):  значение абсорбции ниже 0.100.

 отриц. контроль (B1 и С1):  значение абсорбции ниже 0.300.

  • cut-off контроль (СО) в C1/D1 значение абсорбции между 0,350 – 0,550

  • Положительный контроль (D1) значение абсорбции должно быть равно или более чем значение Cut-off



Результаты


^ Среднее значение абсорбции cut-off контроля (CO)

Рассчитать среднее значение абсорбции для 2 определений cut-off контролей (напр., C1/D1)

Пример: (0,44+0,46) ÷ 2 = 0,45 = CO
средние значения абсорбции пациента

более чем на 10% выше CO

Þ положительный результат
средние значения абсорбции пациента

до 10% выше или до 10% ниже CO

Þ серая зона Þ повторить анализ

через 2-4 недели на новых образцах
результат второго анализа в серой зоне

Þ Отрицательный
средние значения абсорбции пациента

более чем на 10% ниже CO

Þ Отрицательный

Результаты в единицах ДРГ [DU]




Пример:

Интерпретация результатов


Cut-off значение: 10 DU

Серая зона: 9 - 11 DU

Отрицательно: < 9 DU

Положительно: > 11 DU







Схожі:

Эхинококк igG (eia 34 72 ) iconMycoplasma pneumoniae igG (eia 3499)
Набор mycoplasma pneumoniae igg elisa это набор для определения антител класса IgG к Микоплазме в сыворотке человека
Эхинококк igG (eia 34 72 ) iconDrg® Трихинелла IgG (eia-35 21 ) Для диагностики In Vitro предназначение
Иммуноферментный анализ для качественного скрининга антител класса IgG к Trichinella в сыворотке
Эхинококк igG (eia 34 72 ) iconTaenia solium IgG ( Свиной цепень – цистицеркоз) (eia-351 3 )
Иммуноферментный анализ для качественного скрининга антител класса IgG к Taenia в сыворотке
Эхинококк igG (eia 34 72 ) iconDrg® Вирус Краснухи IgG (eia-3510)
Иммуноферментный набор для количественного определения антител класса IgG к вирусу краснухи в сыворотке человека
Эхинококк igG (eia 34 72 ) iconDrg® Токсокара IgG (eia-3518) Для диагностики In Vitro предназначение
Иммуноферментный анализ для качественного скрининга антител класса IgG к Toxocara в сыворотке
Эхинококк igG (eia 34 72 ) iconЦитомегаловирус (cmv) Igg elisa eia-3468 96 Wells 06/07
Набор для определения IgG антител к вирусу Цитомегалии (cmv) производства drg включает материалы для количественного и качественного...
Эхинококк igG (eia 34 72 ) iconDrg® Вирус простого герпеса 1 типа IgG ( eia -3489)
Иммуноферментный анализ для качественного и полуколичественного определения антител класса IgG к Вирусу простого Герпеса 1 и 2 типа...
Эхинококк igG (eia 34 72 ) iconDrg® Вирус простого герпеса 2 типа IgG ( eia -3487)
Иммуноферментный анализ для качественного и полуколичественного определения антител класса IgG к Вирусу простого Герпеса 2 типа в...
Эхинококк igG (eia 34 72 ) iconInfluenza virus b igG (eia-4241) Принцип анализа drg novum influenza virus b igg elisa
Б. Разведенные и абсорбированные образцы пациента, а также готовые к использованию контроли пипетируются в лунки. Во время инкубации...
Эхинококк igG (eia 34 72 ) iconDrg® Легионелла IgG/IgM/IgA (eia-2814)
Набор реактивов drg® Legionella elisa предназначен для качественного определения суммарных антител (IgG, IgM, IgA) к Legionella pneumophila...
Додайте кнопку на своєму сайті:
Документи


База даних захищена авторським правом ©zno.znaimo.com.ua 2000-2014
При копіюванні матеріалу обов'язкове зазначення активного посилання відкритою для індексації.
звернутися до адміністрації
Документи