In vitro Вступление Набор для иммуноферментного анализа drg icon

In vitro Вступление Набор для иммуноферментного анализа drg



НазваIn vitro Вступление Набор для иммуноферментного анализа drg
Дата конвертації15.08.2014
Розмір121.22 Kb.
ТипДокументи
джерело

Плацентарный лактоген (EIA-1283)

Ред. 27.12.2005

hPL EIA-1283

Только для диагностического использования in vitro

Вступление

Набор для иммуноферментного анализа DRG® hPL позволяет определить количество Плацентарного Лактогена (ПЛ) человека в сыворотке.

Физиологическая роль ПЛ пока еще не выяснена, но огромное сходство с Гормоном Роста породило гипотезу про то, что ПЛ выступает в качестве регулятора фето-плацентарного роста и других физиологических изменений во время беременности. Предполагается, что уровень этого гормона в сыворотке матери может отражать так называемый «индекс плацентарной функции». Пониженные уровни ПЛ рассматриваются как внутриутробная гибель плода, болезненные для плода роды и асфиксия новорожденных. Это подтверждается особенно, когда снижения уровня повторяются в процессе наблюдения, вызывая хроническое состояние плацентарного и, как следствие, эмбрионального компромисса. Снижения уровня не происходит, если беременность проходит без каких-либо событий, спокойно весь срок. Повышенные уровни обычно показывают оптимальный исход при беременности единственным ребенком. Однако повышения уровня могут показывать важные патологии плода при специфических заболеваниях, а именно: сахарный диабет, эмбриональная макросомия, резус изоиммунизация, гидрамнион.
^ Принцип анализа

Набор для иммуноферментного анализа DRG® hPL - это твердофазный, меченный ферментом, иммуносорбентный анализ (ELISA), основанный на принципе «сендвича». Микротитровальные лунки покрыты моноклональными антителами, направленными против уникального антигенного сайта на молекуле ПЛ. Аликвота пробы пациента с эндогенным ПЛ инкубируется в лунке с ферментным конъюгатом, который из себя представляет моноклональное анти-ПЛ антитело, конъюгированное с пероксидазой хрена. После инкубации несвязавшийся конъюгат вымывается. Количество связавшейся пероксидазы пропорционально концентрации ПЛ в образце. При добавлении субстратного раствора появится окрашивание, интенсивность которого пропорциональна концентрации ПЛ в пробе пациента.
^

Предупреждение для пользователей


  1. Не существует надежных методов определения наличия вируса Гепатита В, ВИЧ или других в реагентах набора. Все реагенты, приготовленные из человеческой крови, как и образцы пациентов, должны рассматриваться как потенциально инфицированные.

  2. Избегайте контакта со Стоп-раствором 0,5 М H2SO4

  3. Растворы, содержащие добавки или консерванты не должны использоваться для анализа.

  4. Только для диагностики in vitro.

  5. Не используйте и не смешивайте компоненты из наборов с разными номерами партии.



Реагенты:

  1. Микротитровальная панель 96 лунок, 12х8 (разламываемые) стрипов, покрыта анти-ПЛ моноклональными антителами.

  2. ^ Набор референс-стандартов 4 флакона по 0,5 мл каждый: 1,25; 5; 10; 20 мг/л; Коэффициент пересчета 1 мг/л = 1 мМЕ/л. Стандарты откалиброваны по международному стандарту NIBSC для ПЛ, IRP (73/545), содержит консервант Проклин 0,3%.

  3. Нулевой стандарт 1 флакон, 90 мл, 0 мг/л, готов к использованию (он же раствор для разведения образцов), содержит консервант Проклин 0,3%.

  4. Ферментный конъюгат 1 флакон, 11 мл: анти-ПЛ антитела, конъюгированные с пероксидазой хрена, содержит консервант Проклин 0,3%.

  5. Субстрат-раствор 1 флакон, 11 мл, готов к использованию, Тетраметилбензидин (ТМБ),

  6. Стоп-раствор 1 флакон, 6 мл, готов к использованию, 0,5 М H2SO4.


Внимание: дополнительный Нулевой Стандарт для разведения проб пациентов доступен по первому запросу.

^

Необходимые материалы, не входящие в набор


  1. Ридер для микротитровальных панелей (450±10 нм) (например, DRG Instruments Microtiterplate Reader)

  2. Прецизионные микропипетки со съемными наконечниками (10 мкл, 50 мкл, 100 мкл, 1000 мкл)

  3. Абсорбирующая бумага

  4. Дистиллированная вода

  5. Пробирки для разведения образцов (по 1 для каждого образца, стандартные без покрытия 12 х 75 мм)
^

Условия хранения


Реагенты сохраняют реакционную способность до окончания срока годности при хранении в закрытом виде при 2-8°С. Не использовать реагенты после этой даты.

^ Ферментный конъюгат, Субстрат-раствор, Стандарты и Нулевой Стандарт должны храниться при 2-8°С.

Микротитровальные лунки должны храниться при 2-8° С. После вскрытия упаковки необходимо плотно зарыть ее снова. Реакционная способность лунок сохраняется 6 недель во вскрытом, но плотно запечатанном пакете с влагопоглотителем.
^ Забор проб и подготовка реагентов

  1. Заберите кровь венепункцией, дайте свернуться и отделите сыворотку центрифугированием при комнатной температуре. ^ Образцы, содержащие натрия азид, не допустимы в данном анализе.

  2. Образцы хранятся в закрытом виде до 5 дней при 2-8°С до проведения анализа. Для более длительного хранения необходимо заморозить образцы при –20°С.


^ ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА
Общие замечания

  1. Все реагенты и образцы необходимо довести до комнатной температуры перед использованием. Все реагенты необходимо перемешать, избегая вспенивания.

  2. После начала анализа все этапы должны проводиться без перерыва.

  3. Используйте новый наконечник для каждого образца.

  4. Перед началом анализа рекомендуется подготовить все реагенты, закрепить желаемое количество лунок и т.д.


Подготовка образцов

Перед началом анализа образцы необходимо развести 1:100 Нулевым стандартом.

  1. Добавьте для каждого образца 1 мл Нулевого стандарта в пробирку.

  2. Добавьте 10 мкл каждого образца в соответствующую пробирку. Смешивайте содержимое каждой пробирки в течение 10 секунд в мешалке. Избегайте вспенивания.


^ Замечание по процедуре

  1. Ручное пипетирование: Рекомендуется использовать не больше 32 лунок для проведения одной серии анализов. Пипетирование всех образцов, стандартов и контролей должно быть завершено в течение 3 минут.

  2. Автоматическое пипетирование: Возможно использование полной планшеты из 96 лунок. Тем не менее, рекомендуется завершить пипетирование всех стандартов, образцов и контролей в течение 3 минут.

  3. Все стандарты, образцы, и контроли должны проводиться в дублях при одинаковых условиях тестирования.


^ ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА

  1. Закрепить желаемое количество лунок в держателе

  2. Раскапать 10 мкл стандартов (0; 1,25; 5; 10; 20 мг/л), контролей и предварительно разведенных образцов сыворотки новыми наконечниками в соответствующие лунки

  3. Раскапать 100 мкл ферментного конъюгата в каждую лунку

  4. Тщательно перемешать в течение 10 секунд. Важно добиться полного смешивания на этом этапе.

  5. Инкубировать 30 минут при комнатной температуре.

  6. Резко вытряхнуть содержимое лунок. Промойте лунки 5 раз дистиллированной водой. Выстучите оставшиеся капли на абсорбирующую бумагу.

  7. Добавить 100 мкл Субстрат-раствора в каждую лунку

  8. Инкубировать 10 минут при комнатной температуре

  9. Остановить ферментную реакцию, добавив 50 мкл Стоп-раствора в каждую лунку

  10. Читать OD при 450±10 нм при помощи ридера для микротитровальных панелей


Рекомендуется считывать результаты в течение 10 минут после этапа 11.
Подсчет результатов

  1. Подсчитайте среднюю величину абсорбции для каждого набора стандартов, контролей и образцов пациента.

  2. Постройте стандартную кривую, поместив средние значения абсорбции для каждого референс-стандарта (ось Y) против концентрации в мг/л (ось Х).

  3. Используя средние значения абсорбции для каждого образца, определите соответствующую концентрацию ПЛ в мг/л по стандартной кривой.

  4. Автоматический метод: результаты в инструкции были посчитаны автоматически с помощью программы 4 PL. Другие функции обработки данных могут давать отличные данные от ниже перечисленных.

  5. Концентрация в пробе может быть считана прямо из данной кривой. Образцы с концентрацией выше, чем у наивысшего стандарта, должны быть разведены. При этом обязательно принимается во внимание фактор разведения.


^ Пример стандартной кривой


Стандарт

Оптические Единицы (450 нм)

Нулевой стандарт (0 мг/л)

0,03

Стандарт 1 (1,25 мг/л)

0,17

Стандарт 2 (5,0 мг/л)

0,65

Стандарт 3 (10,0 мг/л)

1,71

Стандарт 4 (20,0 мг/л)

1,84


^ Нормальные значения:

Настоятельно рекомендуется каждой лаборатории разработать свои собственные нормативы.


^ Диагностика беременности

Одноплодная беременность

Многоплодная беременность

10-12 неделя

0,05-1,00 мг/л




^ 12-14 неделя

0,10-1,7 мг/л




14-16

0,3-2,8 мг/л




16-18

0,5-3,5 мг/л




18-20

0,9-4,0 мг/л




20-22

1,1-5,0 мг/л

2,2-7,0 мг/л

22-24

1,3-5,8 мг/л

3,0-8,1 мг/л

24-26

1,6-6,7 мг/л

3,6-9,2 мг/л

26-28

2,0-7,7 мг/л

4,1-10,3 мг/л

28-30

2,7-8,5 мг/л

4,6-11,7 мг/л

30-32

3,2-9,5 мг/л

5,0-13,0 мг/л

32-34

3,7-10,1 мг/л

5,4-15,1 мг/л

34-36

4,0-10,7 мг/л

5,7-17,8 мг/л

36-38

4,3-11,2 мг/л

5,9-19,7 мг/л

38-40

4,4-11,7 мг/л

5,8-19,6 мг/л

40-42

4,3-11,6 мг/л





^ Характеристики анализа


  1. Рабочий диапазон

Рабочий диапазон лежит в районе значений 0 – 20 мг/л


  1. Специфичность

Антиген

Эквивалент hPL

ХГЧ 2000 МЕ/л

не определяется

АФП 300 МЕ/л

не определяется

СТГ 100 мкг/л

не определяется

Пролактин 200 мкг/л

не определяется




  1. Чувствительность

Минимальная определяемая концентрация ПЛ для данного набора 0,043 мг/л


  1. Точность

А. Внутренняя точность определяется повторными тестами трех различных сывороток в одном анализе.


^ Образец сыворотки

1

2

3

Кол-во повторений

18

18

18

Средние значения ПЛ (мг/л)

0,66

2,34

6,24

Стандартное отклонение

0,04

0,13

0,42

Коэффициент вариации (%)

6,06

5,55

6,73



Б. Внешняя точность определяется повторными измерениями трех разных контрольных сывороток в нескольких различных анализах


^ Образец сыворотки

1

2

3

Кол-во повторений

39

24

24

Средние значения ПЛ (мг/л)

0,68

2,52

6,87

Стандартное отклонение

0,06

0,18

0,39

Коэффициент вариации (%)

8,82

7,14

5,67




  1. ^ Воспроизводимость и линейность


А. Воспроизводимость

Различные образцы сыворотки с известным уровнем ПЛ были смешаны и протестированы в дубликатах. Воспроизводимость равна 101,17%


Образец

Добавленные концентрации

Ожидаемые концентрации

^ Наблюдаемые концентрации

Воспроизводимость




мг/л

мг/л

мг/л

%

1

0,00

0,00







0,63

0,55

0,63

88,6

2,50

2,40

2,50

96,2

5,00

5,21

5,00

104,2

10,0

8,58

10,00

85,8

2

0,00

1,93







0,63

1,39

1,59

87,6

2,50

3,16

3,46

91,4

5,00

5,21

5,96

87,4

10,0

9,81

10,96

89,5

3

0,00

4,67







0,63

1,67

1,59

105,0

2,50

3,88

3,46

112,2

5,00

6,69

5,96

112,2

10,0

11,66

10,96

106,3


Б. Линейность

Два образца пациентов разводились Нулевым стандартом


Пациент№

Разведение

^ Наблюдаемые концентрации

Ожидаемые концентрации

Воспроизводимость







мг/л

мг/л

%

1

нет

1,93

1,93




1:2

0,84

0,96

86,7

1:4

0,45

0,48

93,7

1:8

0,26

0,24

108,0

1:16

0,12

0,12

95,5
















2

нет

4,67

4,67




1:2

2,28

2,33

97,5

1:4

1,06

1,17

90,7

1:8

0,64

0,58

109,2

1:16

0,31

0,29

106,3


^ Контроль качества

Опыт лабораторной практики предполагает проведение контролей для каждой калибровочной кривой.

Хук-эффект

Не наблюдается до 700 мг/л ПЛ.
^ Ограничения процедуры

  1. Надежные результаты можно получить только при полном понимании инструкции и следовании опыту лабораторной практики.

  2. Результаты, полученные при использовании данного анализа должны служить дополнением к другим диагностическим процедурам и информации, полученной врачом.

  3. Процедура промывки является критической. Недостаточная промывка может влиять на достоверность результатов анализа.





Нулевой стандарт

мл

Образец

мкл




Ферментный конъюгат

мкл

Стандарты

мкл

Разведенные образцы

мкл




Субстрат-раствор

мкл




Стоп-раствор

мкл

Стандарт 0

Стандарт 1

Стандарт 2

Стандарт 3

Стандарт 4

Образец 1

Образец 2

Образец 3

Образец 4

Образец 5

Образец 6


1

1

1

1

1

1


10

10

10

10

10

10


Перемешивать 10 секунд


100

100

100

100

100

100

100

100

100

100

100

10

10

10

10

10



10

10

10

10

10

10

Тщательно перемешивать 10 секунд, оставить при комнатной температуре на 30 минут. Промыть лунки водой 5 раз

100

100

100

100

100

100

100

100

100

100

100

Оставить при комнатной температуре на 10 мин.

50

50

50

50

50

50

50

50

50

50

50





Схожі:

In vitro Вступление Набор для иммуноферментного анализа drg iconТолько для диагностики ин-витро! Принцип анализа drg novum adenovirus igm elisa
Набор иммуноферментного анализа для качественного и полуколичественного определения антител класса IgM к Аденовирусу в сыворотке...
In vitro Вступление Набор для иммуноферментного анализа drg iconDrg® Helicobacter pylori IgM (eia-2111) Пересмотрено 1 0 2006
Набор для иммуноферментного анализа для качественного определения антител класса IgM к Helicobacter pylori
In vitro Вступление Набор для иммуноферментного анализа drg iconDrg® Эстриол, свободный ( eia-1612 )
Набор drg estriol (неконъюгированный) иммуноферментный (eia) используется для определения in-vitro свободного эстриола в сыворотке...
In vitro Вступление Набор для иммуноферментного анализа drg iconИнструкция по применению набора реагентов для иммуноферментного определения
Набор реагентов «ифа-пролактин-01» предназначен для количественного определения пролактина в сыворотке крови человека методом твердофазного...
In vitro Вступление Набор для иммуноферментного анализа drg iconИнструкция по применению набора реагентов для иммуноферментного определения
Набор реагентов «Стероидифа-тестостерон-01» предназначен для количественного определения концентрации тестостерона в сыворотке крови...
In vitro Вступление Набор для иммуноферментного анализа drg iconИнструкция по применению набора реагентов для иммуноферментного определения
Набор реагентов «Тироидифа-трийодтиронин-01» предназначен для количественного определения концентрации трийодтиронина в сыворотке...
In vitro Вступление Набор для иммуноферментного анализа drg iconИнструкция по применению набора реагентов для иммуноферментного определения
Набор реагентов «Стероидифа-прогестерон-01» предназначен для количественного определения концентрации прогестерона в сыворотке крови...
In vitro Вступление Набор для иммуноферментного анализа drg iconИнструкция по применению набора реагентов для иммуноферментного определения
Набор реагентов «Гонадотропинифа-лг» предназначен для количественного определения концентрации лютеинизирующего гормона (ЛГ) в сыворотке...
In vitro Вступление Набор для иммуноферментного анализа drg iconРаковый эмбриональный антиген (cea) набор для иммуноферментного анализа Каталожный номер: eia -1871
Иммуноферментный набор для количественного определения Ракового Эмбрионального Антигена (cea) в сыворотке человека
In vitro Вступление Набор для иммуноферментного анализа drg iconИнструкция по применению набора реагентов для иммуноферментного определения
Набор реагентов «Стероидифа-кортизол-01» предназ­начен для количественного определения концентрации кортизола в сыворотке крови человека...
Додайте кнопку на своєму сайті:
Документи


База даних захищена авторським правом ©zno.znaimo.com.ua 2000-2014
При копіюванні матеріалу обов'язкове зазначення активного посилання відкритою для індексації.
звернутися до адміністрації
Документи